Великий практикум з ...

ТЕМА 3
МЕТОДИ ОТРИМАННЯ ЛЕЙКО- ТА ЛІМФОКОНЦЕНТРАТУ ДЛЯ ВИВЧЕННЯ ІМУНОКОМПЕТЕНТНИХ КЛІТИН
МЕТА: вивчити фізико-хімічні та біологічні аспекти одержання лейко- та лімфоконцентратів обов'язкової умови аналізу імунокомпетентних клітин.
ПИТАННЯ ДЛЯ ОБГОВОРЕННЯ
1. Стовбурова кровотворна клітина та напрямки її диференціювання.
2. Мітотичний цикл. Характеристика періодів G 1, S, G2, М.
3. Гістогенез Т- і В-лімфоцитів.
4. Циркуляція лімфоцитів у організмі.
5. Принцип методів виділення лейкоцитів (шляхом гемолізу еритроцитів цільної крові, спонтанного осадження еритроцитів, склеювання еритроцитів розчином желатину) та лімфоцитів (на градієнті щільності) з цільної крові.
6. Перелік обладнання, матеріалів та реактивів, їх приготування.
7. Метод визначення життєздатності клітин.
8. Імунологічні методи вивчення кількості та функцій імунокомпетентних клітин з лейкоконцентрату.
Способи отримання лейко- та лімфоконцентрата залежать від мети дослідження та об'єму зразка крові для дослідження.

НАВЧАЛЬНІ ЗАВДАННЯ
ЗАВДАННЯ 1. Підготувати реактиви та обладнання для постановки реакції.

ЗАВДАННЯ 2. Отримання лейкоконцентрату шляхом гемолізу еритроцитів цільної крові (мікрометод).

ЗАВДАННЯ 3. Отримання лейкоконцентрату шляхом спонтанного осадження еритроцитів або склеювання їх розчином желатина (макрометод).

ЗАВДАННЯ 4. Отримання лімфоконцентрату за допомогою градієнту щільності - розчину фікол-верографіну.

ЗАВДАННЯ 5. Визначення життєздатності виділених в суспензії клітин.

ЗАВДАННЯ 6. Приведення суспензії клітин до певної концентрації після їх виділення з цільної крові.

ПИТАННЯ ДЛЯ САМОСТІЙНОЇ РОБОТИ
1. Яка різниця осмотичної стійкості в гіпотонічних розчинах еритроцитів та лейкоцитів? Який їх клітинний механізм?
2. Які правила обліку лейкоцитів у камері Горяєва, коли вони лежать на гранях великих квадратів?
3. Який механізм дії розчину желатини на еритроцити?
4. Чому при центрифугуванні еритроцити та гранулоцити проходять через фікол-верографін, а лімфоцити залишаються в інтерфазі?
5. Як визначити життєздатність лейкоцитів?
6. На яких етапах методів відбуваються втрати лейкоцитів?
7. Який склад поживної суміші для підтримання оптимальної життєдіяльності лейкоцитів?
8. Як обробити лабораторне скло для усунення адгезії лейкоцитів при постановці реакції?